超濾離心管常見問題

離心管是一個簡單的可以承受高轉速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。超濾離心管會有一個類似于內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了,分子量比它大的就截留在上面（即內管中）,就是超濾的原理.常用于濃縮樣品。

超濾離心管的分子量選擇：
按照樣品量和目標分子量選擇適當的超濾離心管，為了得到*高的收率，所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右，不超過目標分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑，膜上的孔并非均勻，離心高壓下也可能滲漏，因此截留孔徑越小，流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大，可選擇較小容積的超濾管多次重復加樣離心。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質，可將待濃縮樣品稀釋到超濾管*大容積再離心，重復2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心，雖然高品質的產品都有防死端設計，可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮，*終體積越小，越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液，必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面，有助于減少膜表面吸附，能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。

超濾離心管是否要預處理：
超濾離心管通常不需要預處理即可使用，不過對于蛋白質樣本處理，特別是較稀的蛋白質溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。雖然PES材料使非特異吸附*小化，但是,某些蛋白,特別是稀的時候,會有問題。非特異結合的程度隨著個別蛋白結構的不同而不同。含有帶電的或者疏水結構域的蛋白質更易于不可逆結合到不同表面。對超濾離心管表面做鈍化預處理可降低蛋白質在膜表面的吸附性損失，大多數情況下，在濃縮稀蛋白溶液之前預處理柱子可以提高回收率，因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。鈍化的方法是預先用*高容積的鈍化溶液預浸泡柱子1小時以上，蒸餾水徹底沖洗柱子，再用蒸餾水離心一次以徹底除去可能殘留在膜上的鈍化溶液。注意鈍化處理后別讓膜干了。如果要留待以后使用，需要加無菌蒸餾水保持膜濕潤。

常用的鈍化溶液可選擇：
1、1％牛血清白蛋白磷酸緩沖液溶液
2、5％十二烷基磺酸鈉蒸餾水水溶液
3、5％Tween-20非離子活性劑蒸餾水溶液
4、5％Triton-X 蒸餾水溶液
5、5％聚乙二醇化合物蒸餾水溶液
6、1％**球蛋白IgG磷酸緩沖液溶液
超濾離心管因為需要高速離心，某些對剪切力或壓力誘導下易變性的不穩定樣品可能不太適合。另外超濾膜上孔徑是平均孔徑，膜容易堵，對于有微小顆粒或者碎片的樣品，*好能先用較大孔徑的超濾管過濾一次，再進行下一步濃縮。

超濾離心管是否可以重復使用：
離心超濾管通常不能**再次性使用。由于單管價格并不便宜，不少人嘗試重復使用----經驗是用蒸餾水清洗膜表面多次，離心一次到兩次，那種可以反向離心的小管子可以加蒸餾水浸泡后反向多離心一次，會好些。可重復用于同一樣品，不用時可用蒸餾水浸泡，但是要防止**污染。不同樣品就不要混用了。有人說泡在20%酒精、1N的NaOH（氫氧化鈉）中，防止長菌，而且防干，只要超濾膜侵了水，就不可以再讓它干，但也有人說會破壞膜結構。反正廠家一般不支持重復用。多次重復使用會堵塞濾膜上的孔徑，甚至出現漏液現象，影響實驗結果。

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